ELISA的常见问题及解决方法
ELISA的常见问题及解决方法
| 问题 | 可能原因 | 解决方法 |
| 高背景或阴性对照只偏高 | 阴性对照孔被阳性对照货样品污染 | 洗涤是，勿将洗液溢出孔外 |
| 抗体非特异性结合 | 封闭液不合适，更换封闭液 | |
| 酶结合物过浓 | 请检查酶结合物是否按说明书规定稀释 | |
| 孵育温度过高 | 检查孵育箱的温度是否正确、稳定 | |
| 底物再使用前曝光 | 应保存再暗处、避光 | |
| 读板前停留时间过长 | 加终止液后3分钟内读数 | |
| 标准曲标准曲线良好，但样本无检测信号 | 样本中无检测物或检测无含量极低 | 设置内参，重新实验 |
| 样本中其它物质影响/掩盖检测 | 作适当稀释，降低其它物质的干扰，或作系列稀释，检测回收率 | |
| 样本中检测物浓度过高，HOOK效应导致假低值 | 适当倍数稀释样本，检测物浓度尽量在试剂盒检测范围内 | |
| 重复性较差 | 微孔中有气泡 | 用针尖挑破气泡 |
| 试剂未混匀 | 确保充分混匀试剂 | |
| 样本中有杂质或沉淀物 | 使用前；离心 | |
| 微孔包被面被吸头划破 | 加液是小心操作 | |
| 使用过的封板胶纸 | 每次须使用新的封板胶封住反应孔 | |
| 假阳性反应 | 洗涤不充分 | 使用前需检查洗板机是否正常工作 |
| 洗板机管道堵塞 | 需经常维护洗板机 | |
| 加结合物是，洒在微孔边缘 | 小心向微孔加入结合物，加入微孔底部中央，避免与孔壁和边缘接触 | |
| 微孔中液体挥发 | 用封板胶密封反应孔，置于湿盒内 | |
| 边缘效应 | 孵育温度不均衡 | 避免在环境温度变化大的地方 |
| 蒸发 | 确保孵育是封闭完好 | |
| 酶标板叠放 | 避免酶标板叠放 |
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